61Kw4_ELISA样本制备指南及注意事项

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ELISA样本制备指南及注意事项

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定义及介绍

ELISA（enzyme linked immunosorbent assay，酶联免疫吸附测定）是最基础的免疫学实验之一，其理论基础是抗原抗体的特异性反应。ELISA因其特异性强、灵敏度高、稳定性好而被广泛使用。ELISA试剂盒检测样品包括血清、血浆、细胞培养上清、灌洗液或尿液等生物样本，实验操作步骤并不繁琐，但实验完成后需要把样本检测结果OD值转化为浓度值，从而供下一步分析所用，因此样品的预处理对于后续数据处理和结果分析非常重要。

样本制备指南

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血清

全血样品于室温放置2小时或2-8℃过夜后于2-8℃，1000×g离心20min，取上清即可检测。收集血液的试管应为一次性的无内毒素试管。避免使用溶血，高血脂样品

2.血浆

抗凝剂推荐使用EDTA-Na

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，样品采集后30min内于2-8℃，1000×g离心15min，取上清即可检测。

3组织匀浆/组织全蛋白

用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃，5000×g离心5-10min，取上清检测。

其余方法：在分析天平（AL204型）上，称量50-100mg组织样本。在样本中加入5倍质量体积的含1%PMSF的1×PBS缓冲液；并用小剪刀等工具将组织样本剪碎（尽可能小块）。注：1×PBS缓冲液使用前，需加入PMSF，现用现加，PMSF终浓度为1mM。打开超声破碎仪，将超声破碎仪的功率调至25%，超声时间2s，间隔时间5s，总时间2min。放入样本，冰上超声3min。视样本匀浆情况调整总时长。超声完成后，将样本放于4℃或冰上裂解30min。打开离心机，将转速调至12000×g；将样本放入离心机，离心10min，取上清，按需要分装，于-20℃贮存。注：留取20μL样本，用于后续BCA法测定样本蛋白含量。

组织匀浆液或组织全蛋白中的蛋白浓度对于检测实验的影响至关重要，建议样本蛋白浓度至少1mg/mL以上，较低浓度蛋白的组织匀浆液有可能导致ELISA检测失败。

4.细胞提取液

贴壁细胞

用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5min后收集细胞；

悬浮细胞

可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每10

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个细胞中加入150-200μLPBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃，1500×g离心10min，取上清检测。注：留取20μL样本，用于后续BCA测定。

其余方法：

对于

贴壁细胞

：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。以2百万细胞为例，在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液，震荡混匀细胞，4℃或冰上裂解30min。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。必要时可以进行超声处理，超声步骤与组织样本相同。

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若所检样本不在说明书所列样本之中，建议做预实验验证其检测有效性。

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若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液，由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。

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某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。

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对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样本，经BCA法测定样本蛋白含量后，建议进行蛋白浓度的统一化，避免因组织重量、细胞数、产物体积等因素造成的人为误差；例如，统一全部检测样本浓度为1-2mg/mL，进行后续的稀释和检测。

众所周知，我国的生育政策是不断变化的，现在二胎政策已经逐渐开放，不过我国的结婚生育率却越来越低，甚至有一部分人没有了生育的想法，造成了新生人口数量逐渐下降，对于已经生育的家庭，有的则会有生育二胎的想法，而且国家也是非常鼓励生育二胎的，并给出了各项补贴福利，那么生二胎有什么补贴？领补贴要什么条件？接下来一起了解下！

生二胎有什么补贴

生二胎有什么补贴？

1、生育津贴

生二胎是我国的重要补助项目，也就是说只要是缴纳过社保的女性，都可以享受到生育津贴，这个补助是给予生育的妈妈生活费，而且是按照缴纳生育津贴基数进行计算的，基数越高，领取的生育津贴也会越多。

2、基本生育免费

有大多数人觉得生育是大事，所以生育二胎的补贴应该增大比例，在没有缴纳社保的情况下，生育大多数都是有自己家庭全额付款的，直到目前，国家推行了基本生育免费制度，有些地区实行了住院分娩免费制度，只要是二胎孕产妇还可以额外领取1000-3000元的补贴。

3、孕产检费用减免

现在孕妇在怀孕的时候，需要经历多项孕产检核查，比如B超检查、遗传病史检查、预产期检查等十几项的检查费用大概需要几百元，如果到指定医疗机构进行孕产检，就可以适当的减免费用。

领二胎补贴要什么条件

领二胎补贴要什么条件？

1、缴纳社保

不管是城镇户口还是农村户口的生育妇女，在缴纳了社保之后，按照规定建立个人账户的，就可以申请二胎补贴。

2、独生子女家庭父母在60岁以上

对于独生子女家庭父母如果都达到了60岁以上，生育妇女就可以享受到领二胎补贴的先决条件。

3、二胎是两个女儿

一般来说，生育二胎的过程中，会出现男女比例的问题，比如一男一女。两个男孩或者两个女儿，只有满足两个女儿的，才可以领取二胎补贴。

二胎补贴领取期限

二胎补贴领取期限

1、二胎生育医疗费用补贴，应该在女职工妊娠至生育或者终止妊娠前申办，错过这个时候就领取不到二胎生育医疗费用补贴。

2、一次性分娩营养补助费和异地就医的生育医疗费，应当在女职工生育或者终止妊娠后1年内申办；

3、二胎生育假期津贴，应该在配偶生育后一年内申办。

需要指出的是，如果二胎生育补贴的领取期限超过后，社保机构也不再予以受理，所以孕产妇也是领取不到二胎生育补贴的。

综上，关于二胎生育补贴政策的详情就分享到这里了，虽然我国全面开放了二胎政策，不过生育依然是很重要的事情，它直接关系到了一个家庭的成长和变化，决定生二胎的父母，需要及时了解二胎生育补贴的动向，做到二胎生育补贴及时领取，这样也可以很好地减轻二胎生育的经济压力。

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